光譜儀類
EN- 更新日期：114-01-15
- 發布單位：儀器資源中心
[陽明校區] 超微量核酸定量光譜儀 NanoDrop ND-1000
- 廠牌型號：NanoDrop ND-1000
- 儀器位置：陽明校區
- 生醫工程館4F. 465室 (B機)
- 生物醫學大樓7F. 701室 (A機)、(E機)
- 護理系館2F. 212室 (F機)
- 圖資大樓6F. 615室 (C機)
- 守仁樓B1. B02室 (D機)
- 使用資格：隨到隨用
- 校內免費，校外請洽中心人員
- 聯絡中心人員：
- 分機：62382
- 信箱：ycirc@nycu.edu.tw
ND-1000超微量分光光度計是NanoDrop的第一個產品，應用液體的表面張力特性，只需要1~2μl樣品即可量測。在偵測台上，經上下臂的接觸拉出固定的光徑（1mm及0.2mm）偵測吸收值，達到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細管等耗材的優點。此產品設計受專利保護，並在全世界廣受歡迎，其準確度與便利性讓科學家得以更有效率進行各項研究（網頁連結）。
- ND-1000使用高能量氙燈（pulsed xenon flash lamp），可提供220~750nm的全光譜偵測，且不需要暖機，開機後可立即使用。搭配高感度CCD array偵測器，偵測吸收值可高達75Abs（dsDNA濃度2~3700ng/μl），大部分純化後的核酸幾乎都不需要稀釋即可偵測。
- 待測樣品的均質性是ND-1000的最高要求，樣品能在偵測前以vortex mixer震勻為最佳，若無vortex mixer也應以pipette吸放數次混勻。若擔心genomic DNA可能因前述動作而斷裂，可改以55ﾟC加熱約一分鐘，使樣品在偵測前呈現均勻狀態。（注意：本中心NanoDrop僅限量測核酸樣品，嚴禁測蛋白質類！）
- 偵測時選擇不同模式，可以得到最快速的結果：
- Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm、260nm、280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。
- UV-Vis – 220~750nm間所有波長的吸收值及光譜（以1mm光徑吸收值呈現）。
| 樣品種類 | 最低濃度 | 最高濃度 (超過此濃度請稀釋樣品) | 再現性 (五重複以上) |
|---|---|---|---|
| 核酸 | 2 ng/μl | 3700 ng/μl (dsDNA) 3000 ng/μl (RNA) 2400 ng/μl (ssDNA) |
濃度範圍在 2-100 ng/μl 時，SD為 ± 2 ng/μl 濃度範圍大於 100 ng/μl 時，CV為 ± 2% |
| 純BSA | 0.10 mg/ml | 100 mg/ml | 濃度範圍在 0.05-10 mg/ml 時，SD為 ± 0.10 mg/ml 濃度大於 10 mg/ml 時，CV為 ± 2% |
使用方法舉例：dsDNA
- 在主畫面點選Nucleic Acid，依軟體跳出對話框動作（確認台面清潔，並在偵測台上點1μl二次水，放下上臂後再按OK）完成電腦與儀器連線。
- 依照DNA所溶於之液體準備該溶液（務必確認DNA溶於二次水、TE buffer或哪一組kit的elution buffer），取出1.5~2 μl點在偵測台上，放下上臂後再按Blank。
- 在右上方拉選Sample Type DNA-50，在Sample ID位置輸入樣品名稱，將樣品 混勻，取出1.5~2 μl點在偵測台上，放下上臂後再按Measure。《下載示範影片》
- 結果：
DNA濃度即以65.003 × 50 = 3250.1算出。
- 260/280介於1.8~2.0通常代表此為較純的DNA（數值隨DNA組成不同會有差異）。
- 260/230高於260/280，介於1.8~2.2通常表示純化過程殘留污染物較少。
- 若欲察看220~340nm間其他波長的吸收值，可使用滑鼠拉動位於230nm的直線，或在右邊 λ 處輸入其他數值。
結果整理：當次偵測完的所有樣品可按Show Report得到，此report可另存為ndj檔案，使用excel開啟。 不同天的結果，可從Data Viewer內選Import Samples，將欲放在同一份report內的樣品挑選出來產生一份新的report。《下載示範影片》
- 本機以隨到隨用為原則
- 機器操作結束後，請使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭台面後，再用二次水測讀背景值，測讀值必須介於±0.05內，否則須重新清潔再重讀，直到範圍內才算清潔完畢，並記載於登記簿上。
注意事項
- 嚴禁使用測定蛋白質
- 偵測後立即使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭台面。先取一張將上下台面的液體吸走，再將此 laboratory wipe 吸過樣品的面反折到內部，折疊四次後以單方向多次擦拭台面（DNA 擦 5次）。《下載示範影片》
- 同一滴液體只能做一次偵測，欲重複定量同一樣品，請擦掉前一滴，重新取出一滴進行偵測。
- 基本上核酸樣品可使用1~2μl做測量，隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求，原則上不超過 2μl，請使用2μl pipette以避免體積不足導致液柱無法完整形成。
- 當軟體跳出錯誤訊息時，請詳細閱讀並依指示進行障礙排除。最常發生的情形是在偵測過程液柱並未正確形成，軟體會出現以下訊息。可先用肉眼觀察液柱是否未完整連接上下台面或樣品內有泡泡，將上臂拉起後，擦掉該滴樣品，再重新進行偵測，必要時可將樣品體積加大至2μl。
- 正確的液柱應為：
- 不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之樣品，其他無腐蝕性之液體皆可使用。
- 儀器上方的黑色線為光纖，使用時請勿拉扯。
- 平時保持台面及儀器本身清潔。
- 定期校正。
- 其他FAQ請參考：ND-1000 Support
- 【ND-1000使用手冊】
- 教學影片「實機操作」 影片一
- 教學影片「實機操作」 影片二
