光譜儀類
EN- 更新日期：114-04-15
- 發布單位：儀器資源中心
[陽明校區] 超微量核酸定量光譜儀 Thermo NanoDrop One
- NanoDrop One Spectrophotometer
- 廠牌型號：Thermo Scientific / ND one
- 儀器位置：陽明校區
- 圖資大樓6F. 615室 (G機)
- 守仁樓B1. B02室 (H機)
- 使用資格：隨到隨用
- 校內免費，校外請洽中心人員
- 僅限核酸樣品使用，嚴禁測蛋白質！
- 聯絡中心人員：
- 分機：62382
- 信箱：ycirc@nycu.edu.tw
NanoDrop One 精密微徑光譜定量儀的原理是利用液體的表面張力特性，只需要1.0~ 2.0μl樣品即可量測。在微量載台上，經上下臂的接觸拉出的光徑，儀器有五段光徑（1mm～0.03mm），儀器偵測時會自動調正光徑間距，依據比爾定律（Beer’s Law）演算回推後得到樣品吸光值及濃度。過程僅需3-8秒，且無需使用耗材（如：石英管、毛細管或微量盤）。
此產品設計受專利保護，並在全世界廣受歡迎，其準確度與便利性讓科學家得以更有效率進行各項研究。
此產品設計受專利保護，並在全世界廣受歡迎，其準確度與便利性讓科學家得以更有效率進行各項研究。
- ND one 使用快閃式氙氣燈（ xenon flash lamp），可提供190~850nm的全光譜偵測，不須暖機即開即用。搭配高感度CCD array偵測器，偵測吸收值可高達 550Abs（dsDNA濃度2~27,500ng/μl），大部分純化後的核酸幾乎都不需要稀釋即可偵測。
- 待測樣品的均質性是 ND one 的最高要求，樣品能在偵測前以 vortex mixer 震勻為最佳，若無 vortex mixer 也應以 pipette 吸放數次混勻。若擔心 genomic DNA 可能因前述動作而斷裂，可改以55ﾟC加熱約一分鐘，使樣品在偵測前呈現均勻狀態。（注意：本中心NanoDrop僅限量測核酸樣品，嚴禁測蛋白質類！）
- 偵測時選擇不同模式，可以得到最快速的結果：
- Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm、260nm、280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。
- UV-Vis – 190~850nm間所有波長的吸收值及光譜（以1mm光徑吸收值呈現）
| 樣品種類 | 最低濃度 | 最高濃度 （超過此濃度請稀釋樣品） |
再現性 （五重複以上） |
|---|---|---|---|
| 核酸 | 2 ng/μL | 27,500 ng/μL (dsDNA) 22,000 ng/μL (RNA) 495 ng/μL (ssDNA) |
濃度範圍在 2-100 ng/μl 時，SD為 ± 2 ng/μl 濃度範圍大於 100 ng/μl 時，CV為 ± 2% |
| 純BSA | 0.06 mg/mL | 825 mg/mL | 濃度範圍在 0.10-10 mg/mL 時，SD為 ± 0.10 mg/mL 濃度大於 10 mg/mL 時，CV為 ± 2% |
| IgG | 0.03mg/mL | 402 mg/mL | 濃度範圍在 0.10-10 mg/mL 時，SD為 ± 0.10 mg/mL 濃度大於 10 mg/mL 時，CV為 ± 2% |
- 本機以隨到隨用為原則
- 機器操作結束後，請使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭台面後，再用二次水測讀背景值，測讀值必須介於±004內，否則須重新清潔再重讀，直到範圍內才算清潔完畢，並記載A260與A280 數值於於登記簿上。
＊嚴禁使用測定蛋白質＊
- 偵測後立即使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭台面。先取一張將上下台面的液體吸走，再將此 laboratory wipe 吸過樣品的面反折到內部，折疊四次後以單方向多次擦拭台面（DNA 擦 5次），須以指腹大力推，確保清潔完全，上下載台皆需擦拭。
- 同一滴液體只能做一次偵測，欲重複定量同一樣品，請擦掉前一滴，重新取出一滴進行偵測。
- 基本上核酸樣品可使用 1~2μl 做測量，隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求，原則上不超過 2μl，請使用 2μl pipette 以避免體積不足導致液柱無法完整形成。
- 當軟體跳出錯誤訊息時，請詳細閱讀並依指示進行障礙排除。最常發生的情形是在偵測過程液柱並未正確形成。可先用肉眼觀察液柱是否未完整連接上下台面或樣品內有泡泡，將上臂拉起後，擦掉該滴樣品，再重新進行偵測，必要時可將樣品體積加大至 2ul。
- 正確的液柱應為：
- 不可使用含有 Hydrofluoric Acid (HF) 之樣品，其他無腐蝕性之液體皆可使用。
日常與定期維護
- 儀器外觀檢查：檢查外觀是否有受損。
- 儀器外觀清潔：使用拭鏡紙清潔儀器上殘留之灰塵。
- 儀器量測載台清潔：先點 3-5μL 的二次水於載台上，輕輕放下上臂，使上下載台都可以浸到二次水，靜置約 2-3分鐘。再將二次水以乾淨的拭鏡紙擦拭掉，即完成載台清潔。(User manual p.208)
- 確認量測載台清潔狀況：進入核酸偵測模式 (Nucleic Acid)，以二次水做blank，擦掉之後，再以二次水進行偵測。確認A260及A280的數值是否都在±0.04 (10 mm path)範圍內。若有，表示完成載台清潔；若超過此範圍，則須依上述步驟重複進行清潔及檢測。
- 簡易中文操作手冊
- NanoDrop One: 基本操作與DsDNA偵測
- NanoDrop One: UV-VIS Detection 全光譜偵測
- NanoDrop One 核酸應用：Oligo DNA, Microarray dye-labeling efficiency, etc.
- NanoDrop One 清潔步驟與確認（每次用完請確實清潔！）
- NanoDrop One 檔案查找 Data History
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